仪器简介

• Beckman Coulter 公司MoFlo XDP 是高速分选型流式细胞仪，可以对样本中特定的细胞进行定量（所占百分比、单细胞表面相对蛋白表达强度等），并对目标细胞进行分选纯化（据标记情况可达99%以上的纯度）。分选纯化后的细胞活性高，细胞状态好，可进行下游的细胞培养、功能测定、动物试验和RNA/DNA/蛋白抽提等工作。
• MoFlo XDP 可对样本中任意含量的目标细胞进行分析和分选（国内应用的下限目前低至十万分之一的目标细胞），样本单次获取和保存的细胞量可高达10 亿个。分选速度为70000 细胞/秒时仍保持高纯度，硬件丢弃（Hard Abort 或 Electronic Abort）的比例低于5%，保证样本中目标细胞的高回收率。

仪器配置

• 喷嘴大小：70 μm，100μm
• 样本上样管适配器：离心管（0.5 ml/1.5ml/15ml/50ml），普通流式管
• 分选细胞收集管适配器：离心管（0.5 ml/1.5ml/15ml/50ml），6-1536 孔板，玻片
• 可同时进行四路分选、6-1536 孔板单细胞或任意制定细胞数分选、玻片任意矩阵分选
• 提供上样时温度控制装置和气溶胶防护装置
• 激光系统/滤光片系统/对应的荧光染料（荧光蛋白）-见下表：

适用范围

• 最佳检测和分选细胞大小范围：0.2—30 μm
• 细胞种类：
• 组织分离细胞
• 细胞系
• 细菌
• 酵母
• 血液
• 骨髓
• 体液细胞
• 等等......

仪器分选示意图

主要应用：

• 基于细胞表型的分析分选
• 基于细胞浆或细胞核（胞内）蛋白的分析分选
• 基于？DNA 倍体的细胞周期分析分选
• 基于代谢（如？Side Population ，SP）细胞的分选
• 常见实验方法：荧光蛋白转染、肿瘤干细胞和其它干细胞、细胞免疫功能、细胞周期、细胞凋亡、细胞信号传导、细胞器研究等。
• 有标记物的几乎任何细胞的分析分选都可以进行。
• 分选示例：

样品准备指南

• 实验准备阶段：目标细胞的MARKER, 对应的抗体和荧光选择，了解需要检测的目标细胞的特异性标记和对应的抗体，选择商品化的抗体(荧光标记或未标记,合适的荧光素或二抗)；选择合适的荧光和抗体对照。
• 样本处理：必须是单细胞悬液。
  • 外周血和骨髓收集时加抗凝剂即可进行染色,可溶解红细胞或直接进行检测和分选。
  • 培养细胞需要消化, 过滤和洗涤至少一次后才能染色。
  • 组织样本必须通过研磨成单细胞并过滤后才能进行染色。
• 荧光染色：按照106有效细胞与1ug 抗体进行染色（或按照抗体说明书推荐的量进行）。如果商品化抗体指明实验次数，也要对标本的细胞浓度进行计数。染色通常室温30 分钟或冰上1 小时即可完成，染色体系体积通常在100-500ul，可以适量加入去处非特异性染色的BSA 或其它血清。部分有特殊要求的抗体按照说明书进行染色。避光保存任何加有荧光的样本可以保护荧光素不被其它因素引起的淬灭。
• 稀释和过滤：在染色完成后通常加入？PBS 稀释样本至500-1000ul 备检,在上机前最好再行过滤以防部分细胞(如肿瘤细胞，5Y细胞)聚集成团。
• 细胞分选：
  • 如果样本细胞需要分选，保证样本处理和染色过程在无菌环境进行并尽量低温保证细胞活性，推荐细胞重悬在培养基/生理盐水/PBS。
  • 尽量浓缩分选的起始样本，推荐起始样本体积< 1 ml; 推荐样本中细胞浓度< 1 X 108/ml。
  • 收集分选细胞的试管或多孔板也要无菌，最好使用之前10% 小牛血清封闭4 度过夜，使用前弃去，加入1 ml 培养液待用。
  • 细胞分选所需的时间与样本细胞浓度有关，如果要快速分选，可以减少样本体积，10μm 以下的小细胞适合更高浓度。
  • MoFlo XDP 可提供不同的分选要求组合逻辑来满足不同的实验需求。

预约管理规定

• 本单位预约流式细胞实验的人员，需要提前联系负责人，进行上机前培训，培训合格后方可开通A430房间门禁及仪器预约权限。门禁有效期为半年，半年内未进行任何试验的人员，取消权限。后续如需要使用，需要联系管理人员进行复训。
• 本仪器纳入中科院仪器设备共享管理平台，提供仪器共享和网上实验预约（http://samp.cas.cn）。请提前两天预约，目前开放最长2周的预约时限。
• 仪器开放时间为工作日10:00-17:00，由平台工作人员进行仪器操作。
• 网上预约时，须标注清楚相关信息（示例）：
• 样品来源：Mouse ES （若是非常规样本，请告知细胞大小）
• 样品数量：5
• 激发光：488/561
• 是否为固定样本：否（若是固定样本，请预约当天最后一个时间段）
• 后续是否需要培养：分选后的细胞需无菌培养
• 其他需求：需分选至96孔PCR板中，单细胞分选模式。
• 注意：本实验室不接收感染性样本（或有潜在感染危险的样本）的分析分选！

常用耗材推荐：

• 一次性无菌流式管（带滤膜）：BD falcon（品牌） 352235（货号）
• 40μm细胞筛：BD falcon（品牌） 352340（货号）

仪器负责人

吴海燕 联系方式：54921886（办公室）/54921721（流式实验室）wuhaiyan@ion.ac.cn

权丽娟 联系方式：54921886（办公室）/54921721 （流式实验室）quanlijuan@ion.ac.cn