灵长类研究平台(苏州)提供的技术
 

 

一、恒河猴和食蟹猴寄养服务

  主要利用灵长类平台在苏州的空间,为所内或者相关合作单位提供恒河猴及食蟹猴的饲养服务。  服务内容包括:
  1.基本饲喂工作:将按照苏州整个猴群的饲料配给,提供基础饲料加水果蔬菜。
  2.卫生打扫工作:将提供每日两次的冲洗,保证动物房整洁干净。
  3.基础兽医工作:每年动物常规检疫;每日基础兽医巡视、检查及治疗。
  4.收费标准,所内:25元/猴/天,所外:35元/猴/天。如有特殊投喂需求及需要提供其它服务项目,将根据具体实验要求另行收费 。

  二、基因敲除小鼠/大鼠构建

传统的同源重组方法是通过胚胎干细胞的打靶、筛选、注射、嵌合鼠传代等一系列过程来实现基因打靶。该方法实验周期长,效率低,且真正naïve状态的胚胎干细胞较难获得,使得它的应用受到限制。 

CRISPR/Cas9技术是通过Cas9内切酶,在向导RNA的指引下,对特异识别的DNA片段进行定点切割,产生DNA双链断裂,从而进行基因改造。该技术应用简便,效率较高,可同时对多基因、多位点进行操作,最快可在3个月提供首建鼠。另外,我们尝试优化该方法,应用单切口酶及其他方法,减少脱靶现象,提高敲除及插入的精确性,实现大片段外源基因的插入。

苏州平台利用CRISPR/Cas9技术面向所内外提供啮齿类模式动物构建服务,收费明细如下:

实验物种 实验项目 实验小鼠品系 插入片段情况 收费(万元/位点)
所内 所外
小鼠 基因敲除 B6*D2的F1小鼠 - 4 5
B6纯系小鼠 - 5 6
基因插入  B6*D2的F1小鼠 点突变 6 7
外源基因插入或替换 ≥7 ≥8
B6纯系小鼠 点突变 7 8
外源基因插入或替换 ≥8 ≥10
大鼠 基因敲除 SD - 6 8
基因插入  SD 点突变 8 10
外源基因插入或替换 ≥10 ≥12

备注:   1、需要进行片段插入,请自行构建并提供高质量的载体; 
  2、如果自行制备sgRNA,需确保检测效率高于30%; 
  3、如有特殊情况,另行商讨决定;

  三、小鼠体外受精、单精注射

  为所内从外单位引进转基因小鼠冷冻精液或正常繁殖困难转基因公鼠提供精子复苏冻存、体外受精、单精子注射等服务。收费标准如下:
  1.以B6*D2的F1杂交为背景品系的卵母细胞受体:1.0万元/批(所内)、1.2万元/批(所外),提供3-5只转基因动物,如需增加动物数量,按照每增加一只收费300元计算。
  2.以B6纯系为背景卵母细胞受体:1.2万元/批(所内)、1.4万元/批(所外),提供3-5只转基因动物,如需增加动物数量,按照每增加一只收费500元计算。
  3.选择特定品系小鼠为卵母细胞受体,将根据特定品系要求另行计算收费。

  四、转基因大鼠/食蟹猴构建

通过慢病毒注射大鼠或食蟹猴胚胎卵周隙的方法获得转基因大鼠或食蟹猴。慢病毒注射大鼠胚胎,得到转基因大鼠。需要提供高纯度和高滴度(≥109TU/ml)的病毒进行注射。注射及出生动物检测收费标准为1.2万元/基因;在鉴定阳性后两周内动物将交给各组,如需继续寄养将按照所内动物寄养标准收费。

  慢病毒注射体外构建的食蟹猴胚胎,需要提供高纯度和高滴度(至少109TU/ml)的病毒进行注射。慢病毒先在小鼠上进行效率检测,效率≥70%方进行食蟹猴胚胎注射。

  五、基因敲除食蟹猴构建

  利用Cas9法通过早期胚胎mRNA注射获得基因敲除食蟹猴,收费标准协商决定。  

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